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副猪嗜血杆菌β-半乳糖苷酶的原核表达与活性检测
作者: 刘英玉 [1] ; 夏利宁 [1] ; 刘俊飞 [2] ; 姚刚 [1] ; 何启盖 [3]
关键词: 副猪嗜血杆菌 β-半乳糖苷酶 原核表达 纯化 酶活性
摘要：克隆表达副猪嗜血杆菌β-半乳糖苷酶（BgaC）,并测定其酶学特性。以副猪嗜血杆菌SH0165菌株基因组为模板,将BgaC基因的序列（1 791bp）克隆到pET32a质粒上,并电转化BL21表达菌株。以His标签融合蛋白纯化操作方法纯化表达产物。用聚丙烯酰胺凝胶电泳测定β-半乳糖苷酶的天然分子质量,以邻硝基苯β-D-半乳吡喃糖苷为底物测定其酶学特性。结果表明,在大肠埃希菌BL21中成功表达了副猪嗜血杆菌的BgaC基因,经鉴定pET32a＋BgaC重组菌表达的蛋白大小为82.4ku。纯化后BgaC的酶比活力为1 795U/mg,pET32a＋BgaC重组蛋白的最适pH为6~7,最适温度为30℃~37℃。副猪嗜血杆菌β-半乳糖苷酶（BgaC）具有糖苷酶活性能够介导糖蛋白的降解,在氨基酸序列上存在高度保守的区域,在生物技术领域具有广泛的应用前景。