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高致病性PRRSVJL-04／12株核衣壳蛋白的表达与抗原性分析
作者: 王凤雪 ; 刘莹 ; 杨勇 ; 朱洪伟 ; 孙娜 ; 刘杏 ; 程世鹏 ; 温永俊
关键词: 猪繁殖与呼吸综合征病毒 核衣壳蛋白 原核表达 纯化
摘要：为获得高浓度、高质量的有效原核表达蛋白作为ELISA诊断抗原，通过RT—PCR法扩增猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）JL-04／12株的核衣壳蛋白（N蛋白）基因并克隆到原核表达载体pGEX-6P-1中，转入到大肠埃希菌BL-21感受态细胞，经IPTG诱导表达，通过温度和IPTG浓度的优化，进行重组蛋白的高效表达，经SDS-PAGE和Westernblot对表达产物的特性进行分析，利用GsT柱纯化表达蛋白，并免疫小鼠，ELISA检测其刺激产生抗体的能力一抗原的免疫原性。结果表明，0．1mmol／L的IPTG、28℃诱导4h可高效诱导重组蛋白的表达，在表达上清中目的蛋白达40％，原核表达的重组N蛋白可诱导小鼠产生抗体，抗体效价为1：256。原核表达的N蛋白与PRRSV具有相同的抗原性。