猪PD-1胞外区基因的克隆及原核表达

作者: 杨媛 [1,2] ; 朱艳平 [1] ; 岳锋 [1] ; 孙国鹏 [1] ; 张艳芳 [1] ; 银梅 [2] ; 王选年 [1]

关键词: 猪PD-1 胞外区克隆原核表达

摘要：为研究PD-1/PD-L1通路在猪免疫抑制性疾病中的作用,根据猪的PD-1的基因序列,设计扩增其胞外区的引物,从猪PBMC基因组中通过PCR扩增获得猪PD-1胞外区基因片段,测序正确后克隆至原核表达载体pET-32a（＋）,构建重组原核表达质粒pET32-PD1,转化大肠埃希菌DH5α。挑选可疑菌落鉴定正确后转至Rosetta（DE3）进行诱导表达,表达产物进行SDS-PAGE和Western blot分析。结果表明,在37℃、0.5mmol/L IPTG条件下诱导获得33ku的PD-1胞外区融合蛋白,能够被其多抗血清、His标签抗体和人PD-1抗体所识别。本研究为制备其单克隆抗体和研究PD-1/PD-L1在猪免疫抑制性疾病中的作用提供了材料。

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猪PD-1胞外区基因的克隆及原核表达

作者: 杨媛 [1,2] ; 朱艳平 [1] ; 岳锋 [1] ; 孙国鹏 [1] ; 张艳芳 [1] ; 银梅 [2] ; 王选年 [1]

关键词: 猪PD-1 胞外区 克隆 原核表达

关键词: 猪PD-1 胞外区克隆原核表达