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肠毒性大肠埃希菌肠毒素LTa基因特异性EMA-PCR检测方法的建立
作者: 赵素君 ; 曹冶 ; 谢晶 ; 李江凌 ; 王秋实 ; 叶勇刚 ; 罗丹丹 ; 叶健强 ; 廖党金
关键词: 肠毒性大肠埃希菌 不耐热肠毒素基因 叠氮溴乙锭-聚合酶链反应 检测
摘要：由于传统PCR技术无法区分样品中的死细菌与活细菌,为避免因样品中含有死细菌而造成的假阳性检测结果,本研究根据肠毒性大肠埃希菌（ETEC）不耐热肠毒素LTa基因设计特异性引物,利用叠氮溴乙锭（EMA）处理菌液,沸水浴法制备细菌裂解液,优化PCR条件,建立一种检测肠毒性大肠埃希菌活菌肠毒素基因的EMA-PCR方法。肠毒性大肠埃希菌CVCC196、CVCC197、CVCC200均能扩增出大小为438bp的特异性条带,而其他对照菌株未扩增出条带。经EMA处理,除了完全死菌组外,含有10mL/L～1 000mL/L活菌的混合悬液均可扩增出目的片段。因此,成功建立了一种快速、有效的检测肠毒性大肠埃希菌活菌肠毒素基因的EMA-PCR方法,该方法较传统PCR大大提高了检测的准确性,灵敏度可达19cfu/mL。