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羊口疮病毒TaqMan实时荧光定量PCR检测方法的建立及应用
作者: 姚俊 [1] ; 李富祥 [1] ; 彭海生 [2] ; 鲁富有 [2] ; 张乔明 [2] ; 李华春 [1]
关键词: 羊口疮病毒 TaqMan 实时荧光定量PCR 建立 应用
摘要：根据GenBank中的羊口疮病毒基因组（AY386264）ORFVgORF121及ORFVgORF122基因的DNA序列,应用Beacon Designer 7.7软件设计一对引物和一条TaqMan探针,以含有该引物扩增序列的重组质粒作为阳性标准品,建立了羊口疮病毒TaqMan实时荧光定量PCR检测方法。该方法组内及组间重复试验变异系数均低于2%,上机检测时间不超过40min,检测灵敏度达1×101copies/μL,山羊痘及禽痘病毒特异性检测均为阴性,标准曲线的相关系数（R2）为0.998 088,线性关系良好。应用该方法对云南保山和普洱送检的羊口疮临床组织病料进行绝对定量检测,送检样品抽提DNA中病毒拷贝数分别为1.35×108copies/μL和9.62×107copies/μL。结果表明,研究建立的羊口疮病毒TaqMan实时荧光定量PCR检测方法具有特异、灵敏、稳定、快速和安全的特点,适于羊口疮临床组织样品的早期检测及常规病原监测。