副猪嗜血杆菌荧光定量PCR检测方法的建立

作者: 苗立中 [1,2] ; 沈志强 [2] ; 韩文瑜 [1]

关键词: 副猪嗜血杆菌 infB基因 SYBR GreenⅠ 荧光定量PCR

摘要：为了建立基于SYBR Green Ⅰ的快速检测副猪嗜血杆菌（HPS）的实时荧光定量PCR方法,参照GenBank公布的HPS的infB基因序列（DQ：781933.1）,设计特异性引物;提取HPS基因组,进行PCR扩增,回收目的片段;构建阳性标准模板,建立标准曲线;验证其敏感性、重复性和特异性。结果显示,本试验得到了阳性标准质粒,并建立了标准曲线,线性关系在102copies/μL～108copies/μL检测范围内良好;该方法敏感性达到10copies/μL,比常规PCR高100倍,重复性试验变异系数均小于2.5%,同时对HPS具有良好的特异性。结果表明,本试验建立的副猪嗜血杆菌SYBR GreenⅠ荧光定量PCR检测方法可用于临床对HPS的快速诊断和定量检测。