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微小隐孢子虫CPl5-P23-CPl5／60基因的融合表达及抗血清的制备
作者: 秦培兰 ; 米荣升 ; 黄燕 ; 周鹏 ; 张国恩 ; 苏庆美 ; 呼高伟 ; 曹薇 ; 陈兆国
关键词: 微小隐孢子虫 CP15-P23-CP15 60融合基因 原核表达 重叠延伸PCR
摘要：以微小隐孢子虫基因组DNA为模板，PCR扩增获得子孢子表面抗原CPl5、P23和CPl5／60基因。利用重叠延伸PCR（SOEPCR）将该3段基因片段串联在一起，各基因片段之间引入柔性氨基酸接头（GGGGS）编码基因。将串联基因克隆到原核表达载体pET-28a（＋）上，构建重组表达载体，转化到大肠埃希茵BL21（DE3）中进行诱导表达，将纯化的重组蛋白免疫Balb／c小鼠制备多克隆抗体。结果表明，获得了CPl5-P23-CPl5／60融合基因，并在大肠埃希茵中高效表达，Westernblot显示重组蛋白能被牛抗微小隐孢子虫阳性血清识别，制备的多克隆抗体能被重组蛋白特异性识别，表明获得的重组蛋白具有较好的抗原性。