大片吸虫硫氧还蛋白过氧化物酶基因的原核表达及免疫原性分析

摘要：构建大片吸虫硫氧还蛋白过氧化物酶（Fg．TPx）原核表达质粒，经大肠埃希茵Rosetta表达融合蛋白（Fg．TPx／His）并对其进行纯化和初步鉴定。PCR扩增Fg．TPx的基因片段，亚克隆至pET32a（＋）中构建重组表达载体pPET32a—Fg．TPx。IPTG诱导表达，经镍离子亲和层析分离纯化后，进行sDS-PAGE和Westernblot分析。重组质粒经限制性内切酶双酶切和测序分析表明构建成功，表达产物以可溶性和包涵体形式存在，纯度为90％，Wseternblot证实该蛋白可与抗His单克隆抗体发生特异性结合反应，分子质量为TPx和His分子质量之和，表明是融合蛋白。重组蛋白可以被大片吸虫感染水牛阳性血清特异性识别。免疫家兔产生的抗体效价最高可达1：4000。成功构建了PET32a—Fg．TPx原核表达质粒，重组蛋白得到高浓度表达，具有抗原性，为进一步研究其在大片吸虫病诊断中的应用奠定了基础。