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肺炎支原体P1蛋白羧基端基因片段的克隆及原核表达
作者: 王云龙 [1,2] ; 刘小聪 [1] ; 李玉林 [3] ; 王国强 [3] ; 孙新城 [3] ; 董彩文 [3] ; 程蕾 [3] ; 王继创 [3] ; 邓黎黎 [3] ; 李恒思 [3]
关键词: 肺炎支原体 P1蛋白 套式PCR 原核表达
摘要:根据GenBank公布的肺炎支原体(Mycoplasmapneumoniae,Mp)P1蛋白羧基端序列(AF290001.1),设计合成2对特异性引物,采取套式PCR方法,以肺炎支原体培养物中提取的DNA为模板,扩增肺炎支原体P1蛋白羧基端基因序列,将其克隆至pET32a表达载体,构建重组质粒pET32a/P1(3802-4695),转化大肠埃希菌BL21-gold,测序验证后IPTG诱导表达,经SDS—PAGE表明重组蛋白表观分子质量与预期一致,可溶性表达产物经Westernblot证实重组蛋白具有免疫反应性。
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