猪瘟病毒E2蛋白主要抗原区的原核表达及其间接ELISA检测方法的建立与应用

摘要：采用RT-PCR方法扩增猪瘟病毒（CSFV）E2蛋白主要抗原区基因,克隆入原核表达载体pET32a（＋）,转化大肠埃希菌BL21构建重组表达菌,经SDS-PAGE和Western blot鉴定目的蛋白得到成功表达。利用纯化的重组蛋白作为包被抗原,通过反应条件优化,建立了间接ELISA抗体检测方法。ELISA抗原最适包被浓度为0.5μg/mL（0.05μg/孔）,最佳封闭液为5g/L BSA,待检血清最适稀释度为1∶100,作用时间为1h,酶标抗体最适稀释度为1∶2 000,最适作用时间为45min,室温显色10min。用该方法检测牛病毒性腹泻病毒（BVDV）、猪圆环病毒2型（PCV-2）、猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）、伪狂犬病病毒（PRV）阳性血清结果均为阴性;批内和批间重复试验变异系数分别〈5%和〈8%,表明本方法具有较好的特异性和重复性。应用△E2-ELISA对350份血清样品进行检测,阳性率为77.71%,高于IDEXX试剂盒检测阳性率（67.14%）,与IDEXX试剂盒阳性符合率91.06%,阴性符合率50%,总符合率77.43%。表明本试验建立的间接ELISA方法适于临床CSFV血清抗体的检测。