小鼠抗HCMV-gB多克隆抗体的制备及初步应用

摘要：为了快速制备抗HCMV-gB小鼠多克隆抗体,通过PCR扩增HCMV-gB（57aa～146aa）编码序列并克隆到原核表达载体pET21b（＋）多克隆位点,用重组质粒转化大肠埃希菌Rosetta（DE3）并通过IPTG诱导表达,经镍胶亲和层析纯化和透析复性获得重组蛋白。以CpG-ODN和Al（OH）3复合佐剂作为重组蛋白的免疫佐剂,通过0周和3周2次肌肉注射免疫Balb/c小鼠,并在第5周采血分离免疫血清。用ELISA检测免疫血清效价,并通过Western blot检测免疫血清对哺乳动物细胞表达的HCMV-gB1和gB2的反应性。结果显示,本研究制备的免疫血清ELISA滴度达到1∶51 200～1∶102 400,进行Western blot能够与哺乳动物细胞表达的HCMV-gB1和gB2发生特异性反应。此试验获得了能够用于后续研究工作的抗HCMV-gB小鼠多克隆抗体,本方法具有制备速度快、抗体滴度高和抗原用量少等优点。