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猪繁殖与呼吸综合征病毒GP5和M基因重组腺病毒的构建及表达
作者: 高博 [1,2] ; 马玲 [1] ; 张念 [1,3] ; 毛燕 [1] ; 陈凤莲 [1] ; 张守峰 [2] ; 刘烨 [2] ; 张菲 [2] ; 扈荣良 [2] ; 吴健敏 [1]
关键词: 猪繁殖与呼吸综合征病毒 GP5基因 M基因 重组腺病毒
摘要：为构建猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）重组腺病毒活载体疫苗,本研究将PRRSV GP5和M基因串联表达盒定向克隆至穿梭质粒pacAd5CMVK-NpA多克隆位点处,获得重组穿梭质粒pacAd5CMVK-NpA-GP5-M,与骨架质粒pacAd5 9.2-100共转染293AD细胞,包装出含有GP5和M基因的重组腺病毒rAd5-GP5-M。应用PCR技术、间接免疫荧光、Western blot分析,结果表明,GP5和M基因已经被成功整合到了腺病毒基因组上,且GP5和M蛋白在293AD细胞上均得到了表达;滴度测定表明,该重组腺病毒rAd5v-GP5-M的TCID50为10-6.5/mL;连续传代试验表明该重组腺病毒可在细胞内稳定繁殖,有效地转录并表达GP5和M蛋白,具有较高的遗传稳定性。该研究为PRRSV重组腺病毒疫苗的研制打下了基础。