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兔出血症病毒ZB分离株VP60基因克隆、截短表达与活性鉴定
作者: 杨丽梅 ; 马力 ; 张志美 ; 徐倩倩 ; 郭时金 ; 沈志强 ; 李峰 ; 张颖 ; 王艳萍
关键词: 兔出血症病毒 VP60基因 克隆 截短表达
摘要：为分析兔出血症病毒地方分离株的变异情况，并获得活性良好的兔出血症病毒基因工程抗原，对兔出血症病毒ZB分离株的VP60基因进行了克隆、序列分析与原核表达。ZB株分离病毒与GenBank中的6株RHDVVP60基因的核苷酸序列同源性在92．5％～97．9％之间，参照ZB株分离病毒VP60基因序列，设计合成一对特异性引物，PCR扩增了876bp的VP60基因片段。将目的片段定向克隆至pET30a表达载体中，经鉴定正确后，重组质粒转化BL21表达菌，经IPTG诱导后获得了以包涵体形式表达的重组蛋白，重组蛋白纯化后，Westernblot检测表明具有良好的抗原性与特异性。