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猪传染性胃肠炎病毒、猪流行性腹泻病毒和猪博卡病毒多重PCR检测方法的建立
作者: 焦洋 [1] ; 姜焱 [2] ; 王凯民 [2] ; 张常印 [2] ; 雷治海 [1] ; 唐泰山 [2]
关键词: 猪传染性胃肠炎病毒 猪流行性腹泻病毒 猪博卡病毒 多重PCR 检测
摘要：根据GenBank登录的猪传染性胃肠炎病毒（TGEV）S基因序列、猪流行性腹泻病毒（PEDV）M基因和猪博卡病毒（PBoV）NPl基因序列，设计合成3对引物。通过优化反应条件．，对TGEV、PEDVRNA反转录获得的cDNA模板和PBoV的DNA模板进行多重PCR扩增，同时得到3条与试验设计相符的1060bp（TGEV）、462bp（PEDV）及258bp（PBoV）特异性条带，建立了同时检测TGEV、PEDV和PBoV的多重PCR方法。结果表明，在同一PCR反应体系中，可以同时检测这3种病毒核酸片段，而对其他病毒的检测均为阴性；敏感性分析表明，该方法的最低检测限分别为35、20、10pg的核酸。采用该方法对60份临床样品进行检测，TEGV阳性率为1．6％，PEDV阳性率为6．7％，PBoV阳性率为21．7％，表明建立的方法可以应用于临床检测。