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水牛IFN-γ在毕赤酵母中的表达及其单克隆抗体的制备
作者: 邹新峰 [1,2] ; 郭爱珍 [1,2] ; 陈颖钰 [1,3] ; 胡长敏 [1] ; 王冰 [1,3] ; 刘晓乐 [1,2] ; 谢倩 [1,2] ; 姜勇 [1,2] ; 张策 [1,2] ; 陈焕春 [1,2]
关键词: 水牛 γ干扰素 毕赤酵母 双抗体夹心酶联免疫吸附试验 单克隆抗体
摘要：本研究旨在建立水牛IFN-γ（Bubalus bubalus IFN-γ,Bb IFN-γ）体外释放检测法,为定量检测水牛IFN-γ、开发水牛结核病及其他疫病的检测技术奠定基础。克隆了水牛IFN-γ成熟肽基因片段,根据测序结果,在不改变氨基酸序列的情况下,将密码子替换成毕赤酵母偏爱密码子并合成全基因,进一步用毕赤酵母GS115表达了水牛IFN-γ成熟肽基因。通过水疱性口炎病毒（VSV）在牛肾细胞（MDBK）上检测了其抗病毒活性,抗VSV活性为7.44×105 U/mL。利用酵母表达的水牛IFN-γ蛋白免疫Balb/c小鼠,并筛选阳性杂交瘤细胞,获得5株高效价的单克隆抗体。利用该重组蛋白免疫日本长耳大白兔,得到高效价的抗水牛IFN-γ多克隆抗体。用所获得的单克隆抗体及多克隆抗体建立了检测水牛IFN-γ的双抗体夹心ELISA方法,检测灵敏度达到125pg/mL。通过建立的方法分别检测了原核表达的奶牛IFN-γ、梅花鹿IFN-γ、弥猴IFN-γ以及其他7种非相关重组蛋白,结果表明所建立的方法灵敏度高,特异性好。