副猪嗜血杆菌RfaF基因的原核表达及抗原性分析

摘要：副猪嗜血杆菌（Haemophilusparasuis）RfaF基因编码脂多糖庚糖基转移酶Ⅱ，参与了细菌的黏附入侵和抗血清中补体杀菌作用。为了进一步研究庚糖基转移酶Ⅱ的功能，用原核表达系统表达H．parasuisRfaF基因。用特异性引物扩增H．parasuisSC096株血清4型RfaF基因，得到一条1053bp的片段，将其连接到pET-32a（＋）载体上，构建重组表达质粒，并将其转化至DH5a感受态细胞中，经酶切、PCR和测序进行鉴定。测序正确后，提取重组质粒，转化至E．coliBL21（DE3）感受态细胞中，并用IPTG进行诱导。将诱导产物进行SDS-PAGE和Westernblot分析．结果显示，H．parasuisRfaF基因可以在E．coli中表达，重组蛋白分子质量约为55ku，与预期分子质量大小一致。Westernblot分析表明，RfaF蛋白可以与H．parasuis血清4型阳性高免血清产生特异性结合反应，具有良好的抗原性。本研究结果为深入探讨RafF基因的功能奠定了基础。