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猪瘟病毒E2蛋白抗原表位集中区的原核表达及鉴定
作者: 郭东光 [1] ; 朱艳平 [2] ; 银梅 [1] ; 宁红梅 [1] ; 潘耀谦 [1] ; 刘卫 [1] ; 陈明艳 [1] ; 王选年 [1,2]
关键词: 猪瘟病毒 E2蛋白 抗原表位 原核表达 鉴定
摘要:为获得猪瘟病毒(CSFV)E2蛋白抗原表位集中区原核重组目的蛋白,建立CSFV抗原和抗体快速检测方法。通过扩增CSFV E2蛋白抗原表位集中区基因,亚克隆至表达载pET-30a(+),构建重组原核表达载体pET-30a-E2-1,转化至宿主菌Rostta(DE3)后进行诱导表达。SDS-PAGE分析显示,出现与目的蛋白大小一致的蛋白条带,分子质量大小为31ku。对重组蛋白表达条件进行优化,最终获得其诱导表达的最佳温度为18℃,最佳IPTG浓度为0.1mmol/L。目的蛋白以包涵体形式存在,其表达量约占菌体总蛋白含量的46%。Western blot分析显示,目的蛋白不仅能与兔抗CSFV高免血清反应,还可以与载体特异性标签His单抗反应,表明融合蛋白具有良好的抗原性,为CSFV抗原和抗体检测试剂盒的研制奠定了基础。
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