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猪粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子的表达及其促淋巴细胞增殖活性测定
作者: 崔美实 [1] ; 乔薪瑗 [1] ; 唐丽杰 [1] ; 葛俊伟 [1] ; 王瑞翀 [2] ; 姜艳平 [1] ; 崔文 [1] ; 李一经 [1]
关键词: 粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子 可溶性表达 生物学活性
摘要:根据GenBank上公布的猪粒细胞一巨噬细胞集落刺激因子(pGM—CSF)基因序列(U67175.1)扩增该基因,克隆至pET30b载体,构建重组表达载体pET30b-pGM-CSF,并与分子伴侣辅助质粒pG—KJE8共同转化EcoliBL21(DE3),经IPTG诱导后,通过SDS-PAGE分析,可见表达的目的蛋白大小约为23ku,主要以包涵体形式存在,且在分子伴侣的辅助下,增大了可溶性蛋白的表达量。经镍离子亲和层析纯化后,通过淋巴细胞增殖试验初步检测了pGM—CSF蛋白促进淋巴细胞增殖的活性。结果表明,猪GM—CSF具有明显的体外刺激淋巴细胞增殖的生物学活性,为进一步研究猪GM—CSF的生物学功能以及临床应用奠定了基础。
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