猪 Siglec-10基因的克隆与生物信息学分析

摘要：为了研究猪 Siglec-10（pSiglec-10）的分子生物学特征，利用 Ensemble 网站提供的预测序列（ENSSSCT00000032460）设计一对特异性引物，采用 RT-PCR 技术，克隆 pSiglec-10分子的全长 CDS 区，经过测序比较鉴定正确后，对该分子的基本特征进行分析；构建截短 pSiglec-10的原核表达载体，另将该分子的 CDS 区全长克隆至真核表达载体 pcDNA3．1-3′FLAG，将重组质粒转染至 PK-15和 Marc-145细胞中分析其表达定位特征。结果克隆的 pSiglec-10分子的全长 CDS 为2127 bp，编码709个氨基酸；pSiglec-10基因序列与猴的同源性最高，同源性达73．6％，与鼠的同源性为66．9％；与人的同源性为62．5％，氨基酸序列的同源性分别为58．9％、69．4％和65．3％；pSiglec-10 C 端的 ITIM 区域和磷酸化位点高度保守；pSiglec-10分子具有较好的抗原特性和亲水性；该分子主要表达定位在细胞浆中，在 Marc-145细胞中呈不连续的点状分布于细胞浆，细胞核周围荧光强度较强。pSiglec-10分子全长 CDS 区的克隆和分析将对该分子的功能研究提供一定的理论依据。