山羊IFN-γ基因的克隆表达与多克隆抗体制备

作者: 安贝 ; 赵玄多 ; 杨雯昱 ; 侯伟杰 ; 高洋 ; 陈德坤

关键词: 山羊 IFN-γ 基因克隆原核表达抗体制备

摘要：为获得山羊IFN-γ重组蛋白，提取山羊外周血淋巴细胞总 RNA，反转录得到 cDNA，以此为模板经PCR扩增获得IFN-γ的ORF区，构建重组克隆载体。经PCR扩增得到编码山羊IFN-γ成熟肽的基因序列，连入重组表达载体 pET-32a，转入 BL21（Codon Plus）感受态细胞中，测序并分析。重组表达载体经IPTG诱导后，对产物进行SDS-PAGE分析，并过镍柱纯化。用获得的纯化蛋白免疫家兔制备抗体。结果显示，编码山羊IFN-γ成熟肽部分的片段长432 bp；SDS-PAGE分析显示，融合蛋白大小约为34．9 ku，在30℃条件下，以0．3 mmol／L的IPTG诱导6 h，可得到大量可溶性表达的目的蛋白；间接 ELISA测定制得的多克隆抗体效价为1∶106。

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山羊IFN-γ基因的克隆表达与多克隆抗体制备

作者: 安贝 ; 赵玄多 ; 杨雯昱 ; 侯伟杰 ; 高洋 ; 陈德坤

关键词: 山羊 IFN-γ 基因克隆 原核表达 抗体制备

关键词: 山羊 IFN-γ 基因克隆原核表达抗体制备