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高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒N基因真核表达载体的构建及表达
作者: 廖立珊 [1,2] ; 曾少灵 [1,2] ; 孙洁 [1,2] ; 杨俊兴 [1,2] ; 阮周曦 [1,2] ; 张彩虹 [1,2] ; 曹琛福 [1,2] ; 唐金明 [1,2] ; 叶奕优 [1,2] ; 吕建强 [1,2] ; 秦智锋 [1,2] ; 林庆燕 [1,2] ; 花群义 [1,2]
关键词: 猪繁殖与呼吸综合征病毒 N基因 杆状病毒 表达
摘要：为进一步研究高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）N 蛋白的结构、功能及免疫学特性，提取 PRRSV 云南分离株 A06 RNA，设计特异性引物扩增全长 N 基因，得到长度为372 bp 的目的片段，克隆至杆状病毒 Bac-To-Bac 表达载体 pFastBac HTB 中，转化大肠埃希菌 DH10Bac 进行同源重组，成功构建了含有 N 基因的真核表达载体，转染 Sf9细胞，回收得到重组杆状病毒。SDS-PAGE 和 Western blot 检测结果表明，表达产物17 ku，与预期大小一致，能与 PRRSV 阳性血清产生特异性反应。