金黄色葡萄球菌SirH主要抗原表位区的表达及其抗血清制备

作者: 刘丽娜 [1] ; 张洁 [1] ; 周静 [1] ; 胡祖权 [1] ; 贾义 [1] ; 钟乃凤 [1] ; 谭承建 [2]

关键词: 金黄色葡萄球菌 SirH 抗原表位蛋白表达抗血清制备

摘要：为在大肠埃希菌中表达金黄色葡萄球菌SirH主要抗原表位区并制备相应纯化重组蛋白的抗血清,通过生物信息学软件分析SirH的主要抗原表位区,PCR扩增SirH主要抗原表位区的编码序列,插入表达载体pGEX-4T-1中,构建重组表达载体pGEX4T1-sirH。该载体经酶切和DNA测序鉴定正确后,转化大肠埃希菌BL21,IPTG诱导表达,GST亲和层析纯化获得重组蛋白后,采用Western blot方法检测目的蛋白的反应原性。用纯化的重组蛋白免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体,间接ELISA检测抗血清效价。结果显示,PCR扩增的SirH主要抗原表位区的编码序列长度约759bp,SDS-PAGE初步测定表达蛋白的分子质量约为54ku,与理论值相符。亲和层析纯化获得了目的蛋白,Western blot结果证实该纯化蛋白能与乳房炎患病奶牛恢复期的血清发生反应。应用纯化蛋白免疫新西兰大白兔后制备的抗血清效价在1∶409 600以上。结果表明,SirH主要抗原表位区能刺激机体产生较强的体液免疫应答,SirH是一个有潜力的疫苗候选抗原。

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金黄色葡萄球菌SirH主要抗原表位区的表达及其抗血清制备

作者: 刘丽娜 [1] ; 张洁 [1] ; 周静 [1] ; 胡祖权 [1] ; 贾义 [1] ; 钟乃凤 [1] ; 谭承建 [2]

关键词: 金黄色葡萄球菌 SirH 抗原表位 蛋白表达 抗血清制备

关键词: 金黄色葡萄球菌 SirH 抗原表位蛋白表达抗血清制备