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猪流行性腹泻病毒分离鉴定与实时荧光定量RT-PCR检测方法的建立
作者: 唐金明 [1,2] ; 陈书琨 [1] ; 林庆燕 [1] ; 黄新亚 [3] ; 卢体康 [1] ; 孙洁 [1] ; 阮周曦 [1] ; 曾少灵 [1] ; 祁振强 [4] ; 吕建强 [1] ; 杨俊兴 [1] ; 曹琛福 [1] ; 张彩虹 [1] ; 刘建利 [1] ; 廖立珊 [1] ; 花群义 [1] ; 秦智锋 [1]
关键词: 猪流行性腹泻病毒 病毒分离 实时荧光定量RT-PCR
摘要：采用Vero-76细胞系从临床样品小肠内容物中分离到1株猪流行性腹泻病毒（PEDV）,通过RT-PCR进行了鉴定。针对PEDV,参照保守的M基因序列设计了特异性引物和探针,建立了针对PEDV特异性的实时荧光定量RT-PCR检测方法（PEDV-rRT-PCR）。所建立的方法特异性强,与传染性胃肠炎病毒、轮状病毒、猪细小病毒等猪主要病原体无交叉反应;方法灵敏度高,检测灵敏度达到重组质粒10^-8稀释度（约20cop）;重复性好,组内变异系数≤0.26%。20份田间样品检测结果表明,所建立的PEDV-rRTPCR方法快速、灵敏,检测结果准确可靠,适合用于PEDV的快速检测和流行病学调查。