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新城疫病毒La Sota株NP、P和L基因表达载体的构建及真核表达
作者: 呙会会 [1] ; 刘垒 [1] ; 周祖涛 [1] ; 李筱雯 [1] ; 金卉 [1] ; 肖运才 [1] ; 王贵强 [2]
关键词: 新城疫病毒 P和L基因 辅助质粒
摘要：为研究新城疫病毒NP、P和L蛋白作用机理和新城疫病毒反向遗传操作系统，构建新城疫病毒LaSota株NP、P和L基因的真核表达载体。根据GenBank中新城疫LaSota株的全长序列（JF950510．1），设计4对特异性引物，用RT-PCR法扩增出新城疫病毒LaSota株的NP、P和L基因，将其克隆到真核载体pCl-neo上。通过酶切和测序验证克隆正确，得到重组质粒pCl-NP、pCl-P和pCl-L，瞬时转染到BHK-21细胞中。经RT-PCR、Westernblot、间接免疫荧光试验分别检测NP、P和L蛋白在BHK-21细胞中的表达。经上述三种方法分别检测到NP、P和L蛋白在BHK-21细胞中的表达。重组质粒pCl-NP、pCl-P和pCl-L构建成功，为后期新城疫病毒反向遗传操作系统的构建奠定了基础。