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牛病毒性腹泻病毒 NS3蛋白的原核表达及鉴定
作者: 范晴 ; 谢芝勋 ; 谢志勤 ; 刘加波 ; 庞耀珊 ; 邓显文 ; 谢丽基 ; 罗思思
关键词: 牛病毒性腹泻病毒 NS3 原核表达 鉴定
摘要：旨在制备高纯度的牛病毒性腹泻病毒（BVDV）NS3蛋白，为建立牛病毒性腹泻 ELISA 检测试剂盒奠定基础，用于区分疫苗免疫和野毒感染。根据 GenBank 中已发表的牛病毒性腹泻病毒非结构蛋白NS3基因设计一对特异性引物，用 PCR 扩增1206 bp 目的片段，克隆到 pET-32a 表达载体，成功构建重组质粒 pET-32a-NS3。将重组质粒转化大肠埃希菌 Transetta（DE3）用 IPTG 诱导表达，通过 SDS-PAGE 分析，结果表明重组 NS3蛋白在体外得到较好表达，表达的融合蛋白分子质量为61 ku。可溶性分析表明重组NS3蛋白以包涵体的形式存在，经镍柱 His 标签蛋白纯化后进行 Western blot 鉴定，结果表明表达的 NS3重组蛋白能与 BVDV 的阳性血清反应。说明所制备的 NS3蛋白反应性好，可用作 ELISA 的包被抗原。