牛副流感病毒3型NP基因原核表达及纯化

摘要：旨在对牛副流感病毒3型（BPIV3） NP基因进行分段克隆及原核表达,获得纯化蛋白.根据GenBank中公布的牛副流感病毒3型NP蛋白基因序列（JQ063064）设计合成2对特异性引物,采用反转录-聚合酶链反应（RT-PCR）的方法,以牛胚肾细胞（MDBK）培养的BPIV3 NM09株病毒液提取的RNA为模板,扩增获得2段NP基因序列（NP1、NP2）,将2个片段克隆到PGEX-6P-1表达载体,构建具GST标签的重组质粒PGEX-NP1、PGEX-NP2,将2种阳性重组质粒分别转化至大肠埃希菌BL21（DE3）,优化诱导表达条件进行可溶性分析,并用SDS-PAGE及Western blot进行鉴定,同时利用亲和层析法将重组蛋白纯化.最终获得大小分别为42.3 ku、38.5 ku的重组蛋白,其中PGEX-NP1为包涵体表达,PGEX-NP2为可溶性和包涵体2种表达形式,因PGEX-NP2蛋白疏水性强、等电点较高,其蛋白大小比理论值偏大;Western blot结果显示2种重组蛋白都具有良好的反应原性.