O型口蹄疫病毒核酸检测标准样品的制备

作者: 孙涛 [1] ; 梁成珠 [1] ; 邓明俊 [1] ; 郑小龙 [1] ; 王群 [1] ; 雷质文 [1] ; 曹丙蕾 [2] ; 凌宗帅 [2]

关键词: 定值 O型口蹄疫病毒实时定量RT-PCR 标准样品

摘要：利用基因克隆和体外转录技术制备O型口蹄疫病毒（FMDV）核酸检测标准样品.设计O型FMDV 3D基因的全长开放阅读框的克隆引物,RT-PCR获得相应片段,连接至PGEM-T载体,测序后采用体外转录方法制备RNA纯品,初步定量稀释后,混合分装作为核酸标准样品候选物.采用实时荧光定量RT-PCR方法进行均匀性和稳定性检验,并委托外部实验室采用外标实时定量RT-PCR方法对转录的RNA片段进行定值.通过绘制荧光定量标准扩增曲线计算标准物质含量（拷贝数）,并根据委托单位的定值结果进行不确定度的估算.均一性结果显示瓶间差异小于5％,稳定试验表明室温20℃～25℃（相对湿度20％～50％）14 d,2℃～8℃3个月及-20℃保存1年的含量均无明显变化.核酸标准物质定值为（1.260士0.485）×108 copies,可用作O型FMDV通用核酸检测的标准质控品.

上一篇：黄羽鸡J亚群禽白血病病毒的分离及gp85基因分析
下一篇：中药复方对小肠结肠炎耶尔森菌的抑制作用及对其毒力基因ail的影响

O型口蹄疫病毒核酸检测标准样品的制备

作者: 孙涛 [1] ; 梁成珠 [1] ; 邓明俊 [1] ; 郑小龙 [1] ; 王群 [1] ; 雷质文 [1] ; 曹丙蕾 [2] ; 凌宗帅 [2]

关键词: 定值 O型口蹄疫病毒 实时定量RT-PCR 标准样品

关键词: 定值 O型口蹄疫病毒实时定量RT-PCR 标准样品