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微小隐孢子虫类钙调蛋白基因的克隆与原核表达
作者: 杨晓娇 [1] ; 周鹏 [1] ; 米荣升 [1] ; 黄燕 [1] ; 石凯 [1,2] ; 王晓娟 [1,3] ; 王向佩 [1,3] ; 刘宇轩 [1] ; 雷晓思 [1,2] ; 陈兆国 [1]
关键词: 微小隐孢子虫 类钙调蛋白基因 克隆 原核表达
摘要：为了对微小隐孢子虫（C.parvum）类钙调蛋白（CML）基因进行原核表达,分析重组表达蛋白的反应原性。以C.parvum卵囊cDNA为模板,用PCR方法扩增得到C.parvum CML基因。将CML基因连接到克隆载体pMD18-T,获得重组质粒pMD-CML,经限制性内切酶BamHⅠ和XhoⅠ双酶切后,连接到经相同内切酶酶切的表达载体pGEX-6p-1上,构建重组表达质粒,转化到大肠埃希菌BL21（DE3）中进行诱导表达。利用GST亲和树脂法纯化重组表达蛋白,对纯化的重组蛋白进行Western blot分析。结果表明,成功构建了重组原核表达质粒pGEX-CML,重组质粒转化菌经IPTG诱导后成功地表达出了分子质量约为51ku的重组蛋白rCML,纯化的蛋白rCML能与感染兔隐孢子虫（C.cuniculus）的兔血清发生特异性反应,具有很好的反应原性。