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口蹄疫病毒O型OHM/02株全长cDNA感染性克隆的构建

作者: 苗书魁 [1] 魏玉荣 [1] 魏婕 [1] 米晓云 [1] 汪萍 [1] 马文戈 [1] 王延 [2] 薛英

关键词: 口蹄疫病毒 全长cDNA 转染 病毒拯救

摘要:为构建O型口蹄疫病毒(FMDV)的感染性克隆,采用 RT-PCR将 O型 FMDV OHM/02株全长基因组分为5个重叠的片段进行扩增,克隆至载体 pUC57中,获得全长 cDNA克隆 pPO-1.将线性化的pPO-1与含有编码 T7 RNA 聚合酶的真核表达重组质粒共转染 BHK-21细胞,出现致细胞病变效应(CPE).对拯救的病毒进行RT-PCR扩增、酶切、测序,表明人工设计的分子标记B am HⅠ酶切位点消失,排除了亲本毒株污染的可能性.间接免疫荧光试验可以检测到绿色荧光,电镜观察可观察到病毒粒子,表明构建了具有感染性的 OHM/02毒株全长 cDNA克隆.病毒生长曲线表明,拯救病毒与亲本病毒的复制能力和增殖特性相似.OHM/02株全长 cDNA感染性克隆的构建及拯救可为FMDV致病机理的研究提供一种重要工具,可促进疫苗的研发.


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