巴马香猪氨基肽酶N截短基因的克隆与原核表达

作者: 王文秀 [1] 张艳 [2] 王宝琴 [3] 谢金文 [1] 刘博 [1] 沈志强 [1]

关键词: 巴马香猪氨基肽酶N 克隆原核表达

摘要：为获得猪流行性腹泻病毒(PEDV)受体猪氨基肽酶N(pAPN)抗原,提取巴马香猪小肠绒毛上皮的总RNA,PCR扩增获得pAPN基因的主要抗原区片段,并将其克隆至原核表达载体pET-32a中,将重组质粒pET-32a-pAPN转化大肠埃希菌BL21,通过不同浓度的IPTG、不同诱导时间进行诱导表达,以确定目的蛋白表达的最佳条件.经SDS-PAGE和抗组氨酸标签的单抗进行Western blot检测重组蛋白在大肠埃希菌中的表达,结果显示,原核表达产物在诱导温度37℃、IPTG浓度为0.8 mmol/L,诱导4h可获得最佳表达,产物分子质量约为45 ku,获得的目的蛋白大小与预期一致.

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巴马香猪氨基肽酶N截短基因的克隆与原核表达

作者: 王文秀 [1] 张艳 [2] 王宝琴 [3] 谢金文 [1] 刘博 [1] 沈志强 [1]

关键词: 巴马香猪 氨基肽酶N 克隆 原核表达

关键词: 巴马香猪氨基肽酶N 克隆原核表达