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肠出血性大肠埃希菌O157：H7多重PCR检测方法的建立
作者: 纪雪 张雪 孙洋 孙诗雯 祝令伟 刘军 姜海艳 周伟 梁冰 郭学军 刘彦晶 军事医学科学院军事兽医研究所 吉林省人兽共患病预防与控制重点实验室 吉林长春130122 长春中医药大学附属医院 吉林长春130021
关键词: 肠出血性大肠埃希菌O157:H7 多重PCR 检测 rfbE基因
摘要：为建立肠出血性大肠埃希菌0157：H7的多重PCR检测方法，针对0157菌特异性eaeA基因、fliC基因、志贺毒素基因（stx1和stx2）及rfbE基因设计5对引物，构建多重PCR反应体系，优化反应的引物浓度和温度检测其特异性和敏感性，并对牛、猪、鸡及犬等不同动物来源的样品进行了大肠埃希菌0157检测。结果显示，该方法具有良好的特异性和敏感性，敏感性达到5×10^3CFU。从检测阳性样本中均分离到目的菌。应用建立的方法在确定样品中是否含有大肠埃希菌0157的同时，还能对菌株毒力进行初步判定。成功建立了肠出血性大肠埃希菌O157：H7多重PCR检测方法，为该病原菌感染的预防和监测提供了简便、快速的技术手段，具有良好的应用前景。