犬圆环病毒实时荧光定量PCR检测方法的建立

作者: 孙文超解长占赵冠宇曹亮郑敏曹慧慧张红云韦显凯韩继成温树波肖朋朋靖杰张萍鲁会军金宁一广西大学动物科技学院广西南宁53001 广西动物疫病预防控制中心广西南宁530001 军事医学科学院军事兽医研究所吉林长春130122 广西玉林市动物疫病预防控制中心广西玉林537000

关键词: 犬圆环病毒 SYBR Green Ⅰ 实时荧光定量PCR

摘要：犬圆环病毒（DogCV）是圆环病毒科新发现的圆环病毒，旨在建立犬圆环病毒实时荧光定量PCR检测方法。试验用PCR方法克隆犬圆环病毒ORF2基因保守区域，构建标准阳性质粒pClon007-ORF2。以标准阳性质粒pClon007-ORF2为模板对荧光定量PCR反应体系进行优化。结果表明，所建立的方法Ct值与标准品在4．67×10^9 copies／μL～4．67×10^3 copies／μL范围内呈良好的线性关系，相关系数为0．998，斜率为-3．445。该方法检测灵敏度为4．67×10^1 copies／μL。该方法对狂犬病病毒、犬细小病毒、犬瘟热病毒、犬副流感病毒、犬腺病毒2型等犬常见病原的检测均无交叉反应；所有稀释度标准品模板均在83．35℃出现窄的特异性熔解峰。临床样品检测表明，所建立的实时荧光定量PCR对犬圆环病毒的阳性检测率为12．50％（4／32）。

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