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犬β-防御素cBDl03的原核表达和纯化
作者: 朱骞 包银莉 秦海斌 宋珍华 贺星亮 温海 高一龙 公安部南京警犬研究所警犬技术公安部重点实验室 江苏南京210012 南京农业大学动物医学院 江苏南京210095
关键词: 犬阻防御素103 原核表达 纯化
摘要:将犬β-防御素103(canine β-defensin103,cBD103)基因亚克隆至原核表达栽体pET-32a(+),构建重组表达质粒pET-cBD103,转化大肠埃希菌BL21感受态细胞,IPTG诱导表达后,利用Ni-NTA亲和层析纯化该蛋白,并用肠激酶酶切融合蛋白,SDS-PAGE鉴定表达产物和纯化产物。结果表明,质粒pET-cBD103经PCR及双酶切鉴定证明构建正确,大肠埃希菌中成功表达出目的蛋白,蛋白大小约为24ku,以可溶性表达为主。经过纯化和酶切,得到大小8ku的cBD103,与预期大小一致。该研究在大肠埃希菌中表达了目的蛋白,为下一步大规模制备cBD103奠定了基础。