牛病毒性腹泻病毒实时荧光定量RT—PCR检测方法的建立

摘要：为了建立一种快速、特异、灵敏的检测牛病毒性腹泻病毒（BVDV）Taq Man实时荧光定量RT-PCR的方法，根据NCBIOenBank上已公布的BVDV、猪瘟病毒（CSFV）核酸序列进行比对，利用Oligo6．71软件设计一对引物及一条探针，建立了检测BVDV的TaqMan实时荧光定量RT-PCR方法。通过对该方法的特异性、重复性及其敏感性进行相关试验，结果表明该方法检测出BVDV标准毒株OregonC24 V为阳性，猪圆环病毒2型、猪伪狂犬病病毒、猪传染性胃肠炎病毒、猪流行性腹泻病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒和CSFV的检测均为阴性。对BVDV标准毒株最低检测量达到10-2.5TCID50。该方法检测同一样品重复进行8次检测，结果均一致，表明方法的重复性较好。应用该方法对6批猪瘟疫苗专用血清进行BVDV检测，阳性率为16．7％；猪瘟弱毒苗中未检出BVDV。建立的BVDV TaqMan实时荧光定量RT-PCR方法为生产无BVDV污染的猪瘟苗提供了有力的保障。