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猪圆环病毒2型ORF2基因的原核表达及反应原性分析
作者: 欧云文 马小元 王俊 丁耀忠 张永光 张杰 甘肃农业大学动物医学院 甘肃兰州730070 中国农业科学院兰州兽医研究所 甘肃兰州730046 家畜疫病病原生物学国家重点实验室 甘肃兰州730046
关键词: 猪圆环病毒2型 ORF2基因 原核表达 反应原性
摘要：研究猪圆环病毒2型（PCV2）Cap蛋白的抗原性,为开发PCV2的检测方法奠定基础。以PCV2CAU0673毒株的DNA为模板,扩增获得702bp的目的片段,扩增产物克隆入pET30a（＋）原核表达载体,构建pET30a-PCV2-ORF2重组质粒,转入大肠埃希菌BL21（DE3）;在37℃以1mmol/L IPTG诱导表达6h;采用Ni-NTA树脂亲和层析纯化重组蛋白,并用不同浓度的尿素对纯化蛋白进行复性。SDSPAGE分析表明,该ORF2编码基因在大肠埃希菌中得到表达,蛋白大小约为34ku;Western blot检测结果表明,该重组Cap蛋白与PCV2阳性血清发生特异性反应,与NA-PRRSV和PPV1血清不发生交叉反应。成功构建了PCV2-ORF2原核表达载体,实现了在大肠埃希菌中的表达,纯化后的复性蛋白具有较好的反应原性,为猪圆环病毒2型检测方法建立或试剂盒的开发奠定了基础。
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