猪瘟病毒石门株NS3蛋白的原核表达及其抗体检测间接ELISA的建立

作者: 陆欣然华思红樊钰莹白文顺杜敏孙永科杨玉艾云南农业大学动物科学技术学院云南昆明650201

关键词: 猪瘟病毒 NS3基因原核表达蛋白纯化间接ELISA

摘要：为配合猪瘟新型疫苗的研发,建立了猪瘟病毒NS3蛋白抗体检测间接ELISA,以期达到有效区分新型疫苗免疫猪与自然感染猪（包括常规疫苗接种猪）的目的。以接种猪瘟病毒（CSFV）石门株的PK-15细胞为模板提取总RNA,经特异性PCR扩增获得长度为2 049bp的CSFV NS3基因,将其克隆至插入了具有自聚集自切割功能短肽的原核表达载体pET-32a（＋）,在大肠埃希菌Rosetta（DE3）中优化表达CSFV石门株NS3基因。Western blot分析表明重组蛋白NS3具有反应原性。将纯化的重组蛋白NS3作为包被抗原建立检测CSFV NS3抗体的间接ELISA,以美国爱德士（Idexx）猪瘟病毒抗体检测试剂盒抗体检测结果为标准,对502份血清样品进行检测。结果表明,所建立方法的特异性为96.9%,敏感性为89.7%,总符合率为95.8%,为猪瘟新型疫苗的推广应用提供了血清学检测方法。

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猪瘟病毒石门株NS3蛋白的原核表达及其抗体检测间接ELISA的建立

作者: 陆欣然 华思红 樊钰莹 白文顺 杜敏 孙永科 杨玉艾 云南农业大学动物科学技术学院 云南昆明650201

关键词: 猪瘟病毒 NS3基因 原核表达 蛋白纯化 间接ELISA

作者: 陆欣然华思红樊钰莹白文顺杜敏孙永科杨玉艾云南农业大学动物科学技术学院云南昆明650201

关键词: 猪瘟病毒 NS3基因原核表达蛋白纯化间接ELISA