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羊传染性脓疱病毒CEV112基因的克隆与原核表达
作者: 杨小健 李亚颖 庞峰 李国华 彭冬梅 朱姝 聂鑫 曹瑞勇 王凤阳 杜丽 海南大学热带农林学院 海南省热带动物繁育与疫病研究重点实验室 海口市动物基因工程重点实验室 海南海口570228
关键词: 羊传染性脓疱病毒 CEV112基因 克隆 原核表达
摘要：为了克隆羊传染性脓疱病毒CEV112基因并对其进行原核表达,根据GenBank中CEV112基因序列信息设计1对引物,以CEV基因组为模板,采用PCR扩增出1条大小为867bp的CEV112基因,将其连接到pMD20-T载体上,构建pMD20-T-CEV112重组质粒,转化到大肠埃希菌（E.coli）DH5α感受态细胞中,提取质粒进行酶切鉴定。鉴定正确后构建重组质粒pET28a-CEV112,转化到E.coli BL21（DE3）感受态细胞中。经IPTG诱导表达,表达产物用SDS-PAGE和Western blot进行分析。结果表明,成功构建了pET-28a-CEV112原核表达载体,并在E.coli BL21（DE3）中表达了CEV112基因,表达的融合蛋白大小约36ku,且主要以包涵体形式存在,为后续开展CEV112基因的功能研究奠定了基础。
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