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大肠埃希菌ETT2毒力岛ECs3703基因和HPI毒力岛irp2基因双重LAMP检测方法的建立
作者: 蔡树东 成大荣 朱善元 吴双 左伟勇 扬州大学兽医学院 江苏扬州225009 江苏农牧科技职业学院江苏省兽用生物制药高技术研究重点实验室 江苏泰州225300
关键词: 大肠埃希菌 ETT2毒力岛 HPI毒力岛 双重LAMP
摘要：根据GenBank中大肠埃希菌ETT2毒力岛保守基因ECs3703和HPI毒力岛的保守基因irp2分别设计一套LAMP引物，在同一体系中进行LAMP扩增，通过对体系Mg^2＋、dNTP、内引物及反应温度和反应时间等进行优化，建立了在60℃恒温下对大肠埃希菌ETT2和HPI毒力岛进行同步检测的LAMP方法，并进行了特异性和灵敏性试验。结果显示，所建立的双重LAMP检测方法同时检测ETT2和HPI毒力岛大肠埃希菌检测限均可达到100fg，比常规PCR灵敏度高100倍。利用该方法对8株非大肠埃希菌进行LAMP扩增，结果均为阴性。用该方法对采集的20份临床样品进行检测，与双重PCR检测结果一致。结果显示，该双重LAMP方法可用于大肠埃希菌ETT2和HPI毒力岛的同步快速检测，可作为临床疫病诊断的有效手段。
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