猪繁殖与呼吸综合征病毒GP5蛋白单克隆抗体的制备及鉴定

作者: 李志杰 ; 提金凤 ; 李舫 ; 沈美艳 ; 袁东方 ; 苏成文

关键词: 猪繁殖与呼吸综合征病毒 GP5蛋白真核表达单克隆抗体

摘要：为制备猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）GP5蛋白单克隆抗体,首先构建猪PRRSV GP5基因的真核重组表达载体pCDNA-GP5,将其作为免疫原,对Balb/c小鼠进行免疫。取免疫4次后的小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞SP2/0进行融合。构建PRRSV GP5基因的原核重组表达载体pGEX-6P-GP5,将其转化至大肠埃希菌Rosetta（DE3）并诱导表达。以表达的原核蛋白GP5作为单克隆抗体的筛选抗原,通过间接ELISA进行杂交瘤细胞株的检测和筛选。本研究成功构建了GP5基因的真核重组表达载体pCDNA-GP5,表达并纯化了GP5蛋白。经2～3次亚克隆后获得3株针对GP5蛋白的杂交瘤细胞株,IFA和Western blot对3株杂交瘤细胞株分泌的单克隆抗体进行了鉴定。GP5蛋白单克隆抗体的成功研制,为进一步建立特异性PRRSV检测方法奠定了基础。

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猪繁殖与呼吸综合征病毒GP5蛋白单克隆抗体的制备及鉴定

作者: 李志杰 ; 提金凤 ; 李舫 ; 沈美艳 ; 袁东方 ; 苏成文

关键词: 猪繁殖与呼吸综合征病毒 GP5蛋白 真核表达 单克隆抗体

关键词: 猪繁殖与呼吸综合征病毒 GP5蛋白真核表达单克隆抗体