猪瘟病毒C株特异的TCR Vα5和Vβ6真核表达载体的构建及共转染研究

作者: 王春燕 ; 陈国华 ; 何小兵 ; 曾爽 ; 贾怀杰 ; 房永祥 ; 冯园 ; 李守杰 ; 景志忠

关键词: 猪瘟病毒C株 TCR Vα Vβ基因脂质体转染增强绿色荧光蛋白

摘要：本实验室前期研究发现猪瘟病毒C株特异的TCR Vα5和TCR Vβ6基因家族,为进一步研究其体外表达情况,应用RT-PCR从猪外周血单个核细胞中扩增其全长基因序列,并构建TCR Vα5-pIRES2-EGFP和TCR Vβ6-pIRES2-EGFP重组质粒,将其转染293T细胞。结果显示,TCR Vα5和TCR Vβ6全长基因分别为816bp和945bp,双酶切和核酸序列测定证实TCR Vα5-pIRES2-EGFP和TCR Vβ6-pIRES2-EGFP重组质粒构建正确;转染293T细胞24h后荧光显微镜下可以看到70%以上的细胞表达EGFP蛋白。此外,实时荧光定量PCR可检测到TCR Vα5和TCR Vβ6基因的表达,单独转染组和共同转染组Western blot均可检测到EGFP蛋白的表达,且蛋白杂交带强度相似。研究结果表明,CSFV-C株特异性的TCR Vα5-pIRES2-EGFP和TCR Vβ6-pIRES2-EGFP真核表达质粒可同时转染到293T细胞中,实现体外共表达。

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猪瘟病毒C株特异的TCR Vα5和Vβ6真核表达载体的构建及共转染研究

作者: 王春燕 ; 陈国华 ; 何小兵 ; 曾爽 ; 贾怀杰 ; 房永祥 ; 冯园 ; 李守杰 ; 景志忠

关键词: 猪瘟病毒C株 TCR Vα Vβ基因 脂质体转染 增强绿色荧光蛋白

关键词: 猪瘟病毒C株 TCR Vα Vβ基因脂质体转染增强绿色荧光蛋白