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牛GM-CSF与金黄色葡萄球菌黏附素FnBPB共表达质粒的构建与原核表达
作者: 范鑫 [1] ; 郝永清 [1] ; 张爱荣 [1] ; 陈晓杰 [1]
关键词: 金黄色葡萄球菌 粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子 纤连素结合蛋白B 重叠延伸PCR克隆 原核表达
摘要：采用PCR方法对牛粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子（GM-CSF）和金黄色葡萄球菌FnBPB的D区进行特异性的扩增,并通过重叠延伸PCR扩增GM-CSF-FnBPB串联基因,构建了克隆质粒pMD19-GM-CSF-FnBPB。利用表达载体pET-32a（＋）对该融合基因片段进行原核表达,SDS-PAGE分析表明,在1mmol/L IPTG诱导浓度下,在39ku处出现了与目的蛋白一致的外源蛋白带,Western blot分析表明,该蛋白具有反应原性,进而证明该融合基因成功在原核细胞中表达。