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猪肺炎支原体P97基因特异性随机肽库的构建与初步筛选
作者: 贾球锋 [1] ; 李丽芳 [1] ; 张映 [2] ; 聂向庭 [2]
关键词: 猪肺炎支原体 P97基因 随机肽库 亲和筛选
摘要：构建猪肺炎支原体（Mhp）P97基因特异性随机肽库,探索从中筛选Mhp抗原表位的可行性。PCR扩增获得Mhp P97基因的部分C-端序列,产物用DNaseⅠ消化后将回收的P97随机片段（50 bp-100bp）克隆到pC89pⅧ型噬菌粒载体中,转化XL1-blue感受态细胞,辅助噬菌体VCSM13超感染,获得MhpP97基因特异性噬菌体随机肽库。经过三轮亲和筛选,有效地富集了噬菌体阳性克隆。结果显示,所建肽库的容量约为1.8×10^4,滴度约为1.3×10^12pfu/mL。随机挑取10个阳性克隆进行ELISA检测,结果显示除1号孔外均为阳性。