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甲型H1N1流感病毒HA蛋白的截短表达、纯化及鉴定
作者: 贾园 [1,2] ; 沈阳 [2] ; 邱亚峰 [2] ; 史子学 [2] ; 邵东华 [2] ; 王晓杜 [2] ; 邓绪芳 [2] ; 王皓婷 [2] ; 赵福广 [1]
关键词: 甲型H1N1流感病毒 HA蛋白 原核表达
摘要：构建pET表达载体,通过原核表达系统制备甲型H1N1流感病毒HA的截短表达蛋白,获得纯化蛋白,并分析HA蛋白的反应原性。人工合成A/California/04/2009 H1N1流感病毒HA基因,以其为模板,PCR扩增HA的一部分基因,去除HA蛋白信号肽、跨膜区、胞内区的基因序列,仅扩增HA1和HA2的基因。将扩增的基因构建到pET 28（a）质粒上,重组质粒转化大肠埃希菌BL21（DE3）,IPTG诱导表达HA蛋白,并经过Ni-NTA His Bind柱对其进行纯化,SDS-PAGE电泳鉴定HA蛋白的表达,Western blot鉴定HA蛋白的反应原性。通过原核表达获得了HA的截短表达蛋白,并制备了较高纯度的蛋白,Western blot显示HA蛋白具有很好的反应原性,为建立甲型H1N1流感病毒检测技术奠定了基础。