猪圆环病毒2型鸡痘病毒活载体疫苗诱导的CTL杀伤活性检测

摘要：通过基因工程的方法获得猪圆环病毒2型（PCV-2）二联重组鸡痘活载体疫苗vUTAL-P1-ORF2ORF1和核酸疫苗pVAX1IL-18ORF2ORF1。将采取不同的免疫方案接种本体动物猪,在二免后15 d分别采猪抗凝血,用淋巴细胞分离液处理,得到淋巴细胞作为效应细胞;构建重组质粒p Display-ORF2,并转染PK-15传代细胞,用G418多次筛选得到靶细胞。借助CytoTox 96 Non-Radioactive Cytotoxicity Assay试剂盒从细胞免疫水平的特异性细胞毒性T淋巴细胞杀伤活性评价该重组鸡痘活载体疫苗的免疫效果。结果表明,采用＂Pri me pVAX1-ORF2ORF1,boost vPUTAL-P1-ORF2ORF1＂的免疫方案所获得的杀伤活性最高达66.005%±2.671%（效靶比50∶1）和38.870%±2.883%（效靶比25∶1）,显著高于对照组（P〈0.01）。说明vUTA-P1-ORF2ORF1可以诱导猪产生高水平的特异性细胞毒性T淋巴细胞（CTL）杀伤活性,且以核酸疫苗首免,重组鸡痘活载体疫苗追加免疫的接种方案最优,为PCV-2基因工程疫苗的进一步研究奠定基础。