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共表达猪流行性腹泻病毒S1与GM-CSF蛋白重组腺病毒的构建
作者: 赵攀登 [1] ; 董建国 [2] ; 邓同炜 [1] ; 陈益 [1] ; 徐耀辉 [1] ; 蒋增海 [1] ; 卢建洲 [1] ; 王晓晔 [3] ; 王岩 [1]
关键词: 猪流行性腹泻病毒 S1基因 粒细胞巨噬细胞集落刺激因子 重组腺病毒
摘要：为构建表达猪流行性腹泻病毒（PEDV）S1与GM-CSF融合基因的重组腺病毒,通过FMDV的2A基因序列做为Linker将密码子优化的S1基因和粒细胞巨噬细胞集落刺激因子（GM-CSF）基因连接。构建重组穿梭质粒pShuttle-GM-CSF 2A-S1（m）,并将其电转化至含有腺病毒骨架载体pAdEasy-1的大肠埃希菌BJ5183感受态细胞中,通过同源重组制备重组腺病毒质粒pAd-GMCSF2A-S1（m）。重组腺病毒质粒经PacI线性化后转染HEK-293A细胞,获得重组腺病毒rAd-GMCSF2A-S1。间接免疫荧光和Western blot结果显示,S1和GMCSF蛋白在重组腺病毒感染的HEK-293A细胞中获得表达。该重组腺病毒的制备为PEDV重组活载体疫苗的研究奠定了基础。